Nieuwe protocollen verbeteren MicroRNA-detectie voor diagnose

Volgens een onderzoek dat vandaag is gepubliceerd in The Journal of Molecular Diagnostics, MicroRNA's (miRNA's) die processen coördineren, zoals ontwikkeling, veroudering en bevruchting, zijn veelbelovend als biomerkers voor ziekten. MicroRNA's kunnen routinematig worden verzameld uit vloeistoffen zoals urine, bloed en speeksel. In deze studie presenteren de onderzoekers duidelijke methoden voor het verzamelen en onderzoeken van miRNA, waardoor hun diagnostische precisie aanzienlijk wordt verbeterd.
Hoofdonderzoeker Dominik M. Duelli, PhD, Afdeling Cellulaire en Moleculaire Farmacologie, Chicago Medical School aan de Rosalind Franklin University of Medicine and Science, legt uit:

"Onze studie laat zien dat inherente verschillen in biologische monsters en de methoden om deze te verzamelen en te analyseren, de detectie en kwantificatie van microRNA's dramatisch kunnen beïnvloeden.We hebben maatregelen ontwikkeld om de storende activiteiten te overwinnen en de gevoeligheid van miRNA-detectie tot 30-voudig te verbeteren. "

Wetenschappers zeggen dat er meer dan duizend miRNA's in het menselijk lichaam zijn. Deregulering van specifieke miRNA's hangt samen met ziekte. Het meten van de hoeveelheid miRNA's in lichaamsvloeistoffen kan helpen bij het diagnosticeren van ziekte, aandoeningen of natuurlijke ontwikkelingen, zoals zwangerschap.
Dr. Duelli en zijn team maten de kwantificering van twee miRNA's: MiR-223, die betrokken zijn bij sommige kwaadaardige ziekten, zwangerschap en andere aandoeningen; en miR-16, die fungeert als een tumoronderdrukker en bij sommige kankers, waaronder borstkanker, verloren of gedereguleerd is.
Onderzoeker Sarah Linnstaedt, PhD, van Duke University, zei:

"Een fundamentele uitdaging om microRNA-diagnostiek algemeen beschikbaar te maken, was het onvermogen om voldoende hoogwaardig materiaal te analyseren om te analyseren." Ons document schetst manieren om bloedplasmamonsters effectief te verzamelen, waardoor we een stap dichter bij het doel komen om ziektodiagnostiek [miRNA] te maken realiteit."

De onderzoekers melden dat kwantificatie wordt beïnvloed door de keuze van bloedafnamebuisjes. Zij ontdekten dat de beste resultaten werden verkregen door grijze bovenbuizen die het anticoagulerende natriumfluoride en kaliumoxalaat (NaF / KOx) bevatten, terwijl traditionele groene topbuizen vrijwel volledig interfereerden met miRNA-detectie.
Hoewel miR-16 ongeveer 500 keer zo rijk is aan bloedplasma in vergelijking met miR-223, waren de resultaten voor beide vergelijkbaar, wat suggereert dat de detectieverschillen die voortkomen uit de keuze van de verzameltechniek van toepassing zijn op andere miRNA's. Bovendien werden er meer variabele resultaten geproduceerd waarbij miR-223 in serum werd verzameld, wat aangeeft dat voor sommige miRNA's het onderzoek van bloed in plasmavorm de voorkeur geniet.

Ten slotte zagen de onderzoekers dat verschillen in plasmastructuur tussen individuele donoren verschillende miRNA-metingen produceerden.
Dr. Duelli, legt uit:

"Deze resultaten verhogen de mogelijkheid dat factoren zoals dieet, lichaamsbeweging, circadiane ritmen en seizoenen, die de bloedchemie veranderen, van invloed kunnen zijn op miRNA-detectie en kwantificatie.
De implicaties van dit werk zijn dat, zonder rekening te houden met de variabele die we hebben vastgesteld, miRNA-kwantificering van menselijke monsters mogelijk niet betrouwbaar is met het oog op de ontwikkeling van biomarkers. We bieden benaderingen die een getrouwe kwantificering van miRNA-abundantie in lichaamsvloeistof mogelijk maken, "

Geschreven door Grace Rattue